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寄生虫とベクター 16 巻、記事番号: 282 (2023) この記事を引用

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リーシュマニア症は、地中海地域の風土病である人獣共通感染症であり、乳児リーシュマニアがヒトおよびイヌの感染症の原因物質となっている。 亜種レベルでのこの寄生虫の特徴付けは、病気の臨床経過（耐性株、内臓型および皮膚型のリーシュマニア症など）を評価するため、また感染源を特定するために疫学研究に役立ちます。 多座酵素電気泳動 (MLEE) は、リーシュマニア菌株を特徴づけて同定するための参照方法として現在認識されている方法ですが、煩雑で時間がかかり、培養寄生虫が必要です。 これらの欠点により、リーシュマニア原虫をタイピングするための、多座位マイクロサテライトタイピング (MLMT) や多座位配列タイピング (MLST) などの他の方法の開発が行われました。 ただし、これらの方法はまだ日常的な使用には適用されていません。 この研究では、まずMLSTを使用して、代謝酵素をコードする単一コピー遺伝子の有益な多型を同定し、その後、L.インファンタム寄生虫におけるこれらの多型を調査するために、高分解能融解（HRM）分析に基づく2つの迅速なジェノタイピングアッセイを開発しました。

14 のハウスキーピング遺伝子をターゲットとするカスタマイズされた配列決定パネルが設計され、9 つの L.幼児イヌおよびヒト株/分離株に対して MLST 分析が実行されました。 2 つの定量的リアルタイム PCR-HRM アッセイは、リンゴ酸酵素 (ME) およびグルコース-6-リン酸イソメラーゼ (GPI) 遺伝子に関する 2 つの有益な多型 (それぞれ 390T/G および 1831A/G) を分析するように設計されました。 2 つのアッセイは、イタリア中南部およびパンテレリア島からの 73 の臨床サンプル/分離株に適用され、結果はサンプルのサブセットにおける DNA 配列決定によって確認されました。

MLST 解析と Genbank データベースで入手可能な配列により、ME および GPI をコードする遺伝子に関する 2 つの有益な多型の同定が可能になりました。 73 の臨床サンプル/分離株において 2 つの HRM ベースのアッセイを使用してこれらの多型を迅速にスクリーニングした結果、7 つの遺伝子型が同定されました。 全体として、遺伝子型 1 (配列タイプ 390T/1831G) がサンプル全体で最も多く存在し (45.2%)、最も一般的な L.infantuum ザイモデム (MON-1、MON-72) と相関していました。 興味深いことに、パンテレリア島では、最も一般的な遺伝子型 (70.6%) は遺伝子型 6 (配列タイプ 390T/1831A) でした。

当社の HRM アッセイを臨床サンプルに適用することで、寄生虫の分離や培養を必要とせずに 7 つの異なる遺伝子型を特定することができました。 我々は、これらのアッセイが、L.幼児の疫学調査や新たな感染源の同定のための、迅速かつ日常的で安価なツールとして使用できることを実証しました。

リーシュマニア症は、地中海盆地に特有の人獣共通感染症であり、主にヒトの皮膚リーシュマニア症と内臓リーシュマニア症（それぞれCLとVL）、および犬リーシュマニア症（CanL）の病原体である乳児リーシュマニアによって引き起こされます。 リーシュマニアの特徴付けは伝統的に多座位酵素電気泳動 (MLEE) によって行われており、現在でも WHO によって寄生虫タイピングの参照方法であると考えられています [1]。 MLEE は、モンペリエ (フランス) のリーシュマニア症センター (MON システム) で開発され、15 の代謝酵素の異なる電気泳動移動度に基づいています: リンゴ酸デヒドロゲナーゼ (MDH)、リンゴ酸酵素 (ME)、イソクエン酸デヒドロゲナーゼ (ICD)、 6-ホスホグルコン酸デヒドロゲナーゼ（PGD）、グルコース-6-リン酸デヒドロゲナーゼ（G6PD）、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ（GLUD）、NADHジアホラーゼ（DIA）、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ1（NP1）、プリンヌクレオシドホスホリラーゼ2（NP2）、グルタミン酸-オキサロ酢酸トランスアミナーゼ1および2（GOT1、GOT2）、ホスホグルコムターゼ（PGM）、フマル酸ヒドラターゼ（FH）、マンノース-リン酸イソメラーゼ（MPI）およびグルコース-6-リン酸イソメラーゼ（GPI）[2]。 アイソザイム移動度を参照菌株と比較することにより、300 を超えるザイモデムが同定され、これらはすべて MON 用語を使用して参照されます。 L.インファンタムに関しては、45 個のザイモデムが同定されています。 人獣共通感染症 VL および CanL は、主に MON-1、MON-24、MON-34、MON-72、MON-77、MON-80、MON-98、MON-105、MON-108、MON-199、および MON によって引き起こされます。 -199 NP1130 バリアントおよび MON-281。 特に、MON-1 はヒトとイヌで最も頻度の高い酵素であり [3、4]、次に MON-72 が続きます。MON-72 は CanL でより拡散していますが、ヒトの患者でも確認されています [5]。 対照的に、一部のザイモデム (MON-11、MON-27、MON-28、MON-29、MON-33、MON-189) はヒトでのみ単離されています [6]。 さらに、HIV 患者ではいくつかの非 MON-1 寄生虫が報告されています [7]。 これらの発見は、歴史的に人間への主な感染源と考えられてきた犬が病気の伝播において果たしている役割に疑問を投げかけている。 実際、イヌ集団で同定された酵素の均一性は、ヒトで見られる酵素の不均一性を反映していません。